Dr. Stephen Peters

病理创新， LLC

冰冻切片技术 I >FS 技术 II > FS 技术 III >FS 技术 IV

从锋利的刀片开始

我发现我总是用新的锋利的刀片。我认为我们试图在医药上省钱的一些地方有点\"愚蠢”。您的患者手术要花费数千美元。几百块钱是spent 在一次性用品上，包括膝垫、手套、海绵、窗帘、烧灼器、针头、针头磁铁、血压袖带、静脉输液管……..我们在可能影响程序的最重要决定上节省便士。然而，有些人试图从一次性刀片中获得\"20 次剃须”，从而冒着质量风险。

在我的实践中，我会为每位患者使用新的刀片。一旦我的部分质量开始下降，我会立即更改它。一些组织，如坚韧的胶原组织或钙化组织，会很快使刀片变钝。如果我有时无法用新刀片获得好的切片，我会更换第二个新刀片并轻松准备好优质切片。

安全提示 如果您被仅用于一名患者的刀片割伤自己，您将最大限度地降低传播疾病的风险。如果你被一把用了好几天的刀片割伤自己，那就像睡了无数伙伴……没有乐趣！在这一天以及使用非常灵活的长安全针和烦人的安全手术刀进行 FNA 的时代，出于安全原因，我们可以证明使用锋利的刀片是合理的......并且每次都能获得很棒的冷冻效果！

坐着还是站着

我剪的时候总是坐在凳子上。我希望你学会使用刷子作为一种清晰的精细仪器，能够在飞行时巧妙地操纵显微镜下薄薄的组织雪花！你为什么要弯着腰弯着脖子做这个动作？如果您因为害怕有动物跳出来攻击您而弯腰看洞，这个姿势很好！但是要切割冻结的部分，您需要放松和舒适，这样您的左手才能有最大的控制力。

刷子

我是刷机用户。相信大家首先要学会用好毛笔。我考虑让学生开始使用防滚装置，比如放一个 c在他们学会走路之前拄着拐杖。刷子的目的是在舞台上抓住和操纵该部分。除非你有完美的温度，否则寒冷的部分自然会试图卷曲并远离刷子。出于这个原因，我使用了硬毛和相当宽的抓握面的刷子。我发现中国猪鬃最硬，对我来说效果最好。您可以花大约 3 美元从美术用品商店购买 1/4 英寸 #2 平刷或亮刷，然后将它们剪成一定角度。有了这个倾斜的尖端，刷子像扫帚一样平坦地接触组织，因为刷子被保持在一个角度。我一直不明白为什么有人会想要使用脆弱的骆驼毛刷。该部分可以轻松地从这些柔软的毛发上拉开。

我现在以 3 美元的价格向任何想试用的人提供这些刷子。见仪器

拿着画笔

转动轮子

毫不犹豫地以连续均匀的运动转动轮子。我见过很多冻结的 se表演者用刷子停在一节的开始，慢慢地抓住纸巾，然后开始转动轮子。根据我的经验，这种做法会增加本节开头的潜在伪影、厚度的潜在变化，并导致接近含有脂肪的组织时出现困难。通过练习，通过像我描述的那样握住刷子，操作员能够以连续的动作抓取组织，该动作在组织遇到刀之前开始并继续通过完整的部分。 .

画笔的移动

当木块开始向刀移动时，画笔会与木块同步向下移动。刷子可以轻轻地放在木块底部 2 毫米处，并在木块遇到刀时\"骑在木块上”拉开。正是刷子的向下运动让您在抓住该部分时保持连续运动。

就像接力赛中的接力棒高手。第二名跑步者必须与第一名跑步者并排跑以进行交接。接力棒从不减速。如果第二个赛跑者停下来，第一个赛跑者必须减速停下来，第二个赛跑者必须再次用接力棒加速。

当该部分的前几毫米通过时刀的断面会有一定程度的卷边。卷曲开始时，运动中的刷子将抓住纸巾的边缘并变为朝向您的水平运动。刷子的路径是一个\"肘”形，然后以连续的运动朝向你。重要的是将组织拉向您，而不是将其压向低温恒温器载物台。将组织压到低温恒温器载物台有时会导致组织粘附到载物台上，尤其是当组织是脂肪组织时。这将导致弄脏部分并需要清洁舞台。这种抓住纸巾的动作就像在床上把毯子盖在身上一样。作为刷返回s 抓住下一个部分它完成一个连续的椭圆运动。连续不断地重复切割一个块，就像转动自行车的踏板一样。双手同步盘旋。

准备好带有嵌入介质\"手柄”的块可以使这项工作更容易，而无需用刷子接触组织。

1) 作为块向刷子下降 刷子通过轻轻搁在木块底部 2-3 毫米处并\"骑在木块上”与木块保持同步

2) 当木块与刀片相遇时部分开始卷曲，刷子离开块，同时抓住部分的卷曲边缘。 《抓住卷毛》

3) 画笔随着卷毛跳下木块。 \"刷子跳过刀片”

3) 握住卷曲的刷子将部分水平拉过舞台，就像在床上把被子拉到你身上一样，而不会将纸巾压到舞台上. \"拉过毯子”

取回切片

可以从低温恒温器台或块中取出组织。我经常从舞台上挑选部分。当切片完成后，可以通过将载玻片放在切片上方并将载玻片向下倾斜以接触组织的一部分来拾取组织。小号静电吸引会吸引切片粘附并快速融化到温暖的载玻片上 在组织周围有几毫米\"手柄”的包埋介质是一个优势。这种额外的介质允许在涉及组织之前在任一端卷曲或翻转的误差范围。如果我对切片有特别的困难，我可以在最后 2 毫米之前停止切片。嵌入介质留下部分连接到块这允许部分的固定边缘，用刷子拉伸部分。偶尔遇到困难时，我可能会更幸运地从街区取回该部分。这有时可以解决因卷曲或脂肪粘在舞台上而引起的问题。一些运营商更喜欢这种技术用于他们的大部分部分。为了从块中取出组织，当到达组织远端的介质手柄时，组织被切开并停止。此时起重机k 向后移动，块从刀上反转。用刷子在块面上向下展开切片，然后从块面上而不是平台上拾取切片。

向下滑动控制杆轻轻触摸将以静态或凝聚力漂浮在幻灯片上的部分。尽量避免在此过程中拉伸或折叠切片，方法是保持稳定的手和平行于切片的幻灯片横轴。

从块中检索

1) 一个部分被切割离开顶部的介质附件

2) 向相反方向转动轮子，将切片带回块的表面。

3) 从块中取出部分

快速固定正如我之前提到的，我在转动轮子时用右手握住幻灯片。切片完成的那一刻，我立即拿起载玻片上的组织并立即将其放入固定液中。将固定液打开并放在可立即到达的位置。从手中的幻灯片开始。如果我使用染色架，我会把它放在固定剂罐外面，这样它就不会妨碍我的快速操作。我先把幻灯片固定在 95% etoh 然后放到架子上

如果有延迟在固定纸巾时会出现明显的干燥伪影。根据我的经验，当冷冻切片在台上冷却时，干燥效果很小。从组织接触到温暖的载玻片开始，它开始经历明显的干燥伪影，核细节丢失和细胞质中的液体泄漏。下面的例子显示了相同的组织在热载玻片上延迟 15 秒固定后切片立即固定。差异是惊人的。它还展示了使用该系统通过冷冻切片可能实现的细胞学质量。

2) Same tissue immediately fixed 95% ETOH

2) 相同组织立即固定在 95% ETOH 中

切片厚度

对于普通外科病理学，我建议切割 6 微米。这种厚度会产生丰富的染色，在 2 倍和 4 倍的扫描功率下更容易解释，病理学家在这些地方收集他们的大部分信息。非常薄的切片在这些功率和精细细节下通常看起来很苍白很容易错过。6 微米的切片将提供更多时间来避免干燥伪影。从冰晶伪影中可见的核\"孔”也会减少。特殊情况可能需要更薄或更厚的切片。

切片染色 单独染色食谱是病理学家偏好的问题e.我唯一的建议是不要仓促完成染色过程的任何一步，并保持所有污渍和溶液新鲜并妥善维护。温和的搅动有助于加快过程并保持染色均匀，但应考虑组织的类型及其粘附性（见下文）。

染色时，我发现在载玻片离开上蓝剂后观察它是了解染色是否充分的好方法。

了解染色良好的载玻片与轻微染色的载玻片的颜色和深浅对比。在我们的苏木素中，我寻找一种特定的海军蓝色调来告诉我它染色得很好。请记住，组织的厚度和核材料的量会使载玻片看起来更亮或更暗。然而，这是一种特殊的蓝色调，告诉我幻灯片染色良好。做出自己的观察。这个想法是在继续进行 stai 之前检查幻灯片

我喜欢许多病理学家在扫描功率（即 2 倍或 4 倍放大倍数）下进行大部分观察。在这些权力下，看着污迹斑斑的幻灯片就像在暴风雪中开车一样，你真的看不到太多。在检查淋巴结是否存在转移性疾病时，我会特别注意深度丰富的染色，尤其是曙红。如果伊红染色丰富，则可以更容易地将窦组织细胞的淡粉色细胞质与可能更嗜酸性或更透明的肿瘤细胞细胞质区分开来。

为什么我的组织会脱落？

我不确定组织粘附在载玻片上的科学解释是什么，但我猜这与薄弱有关由新鲜组织中的液体传送到玻璃上的分子水平结合。知道解释的朋友请赐教。我得出这个解释是因为根据我的经验，纸巾越干燥，它粘附的可能性就越小，如果我t一直在福尔马林中似乎有任何坚持\"洗掉”的倾向； \"多汁”组织更好地粘附。我喜欢将它们视为具有\"更多胶水”。根据我的经验，我可以列出几种情况，在这些情况下，我在染色过程中遇到过切片从载玻片上脱落的情况。显然，过度搅动松散的纸巾会抖落。

1) 非常干燥的组织，无论是天生的还是干燥的。 \"少胶”

2）周长面积比大。具有较大周长的细条可以捕捉染色罐中运动的湍流，很容易从载玻片上掉下来。如果薄纤维壁囊肿一开始不是非常\"多汁”的组织，则尤其如此。其中还包括无定形的坏死组织，没有任何东西将它们固定在一起。这也适用于非常厚的部分，这些部分具有较厚的壁以抓住湍流。

3) 氨蓝试剂太浓。-如果你使用氨水发蓝 我的规则是如果我不用抬起鼻子就能闻到它，它太浓了。

4) 100% Etoh 而不是 95%。我有时会让人在我的固定罐中放入 100% Etoh 而不是 95%。根据我的经验，这不会留在幻灯片上。

5) 将一个部分放置在已经在幻灯片上的嵌入介质上。在载玻片上放置多个切片时，注意不要将组织重叠到相邻切片的包埋介质上。

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我们非常感谢 Stephen Peters 博士对这项宝贵技术的慷慨贡献。请访问 http://www.pathologyinnovations.com/ 的原始来源以获取更多更新信息。